VALORES TEÓRICOS:

Los estudios efectuados con el test ELECSYS NSE en 3 centros clínicos de Alemania y en los laboratorios de Roche con 547 personas sanas proporcionaron los siguientes resultados:

16.3 ng/mL (percentil 95)

15.7-17.0 ng/mL (intervalo de confianza del 95%)

Datos provenientes de: Evaluación multicéntrica con el test ELECSYS NSE, estudio N° B99P005, 7/2001.

Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia pueden aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso necesario, establecer sus propios valores.

USO PREVISTO:

Test inmunológico in vitro para la determinación cuantitativa de la enolasa específica neuronal (NSE) en suero humano. La determinación de NSE se emplea para el control del curso del tratamiento y la evolución de pacientes con carcinomas, en particular con el carcinoma pulmonar de células pequeñas y neuroblastomas.

Este inmunoensayo de electroquimioluminiscencia (electrochemiluminescence immunoassay) "ECLIA" está concebido para su empleo en los analizadores automáticos Elecsys y cobas e.

MEDIDAS DE PRECAUCIÓN Y ADVERTENCIAS:

Para el uso diagnóstico in vitro por los profesionales de la salud. Observe las medidas de precaución usuales para la manipulación de reactivos de laboratorio.

Residuos infecciosos o microbiológicos:

Advertencia:

Manipule los residuos como material biológico potencialmente peligroso. Deseche los residuos de acuerdo con las instrucciones y procedimientos de laboratorio aceptados.

Peligros ambientales:

Aplique todas las normas locales de eliminación pertinentes para asegurar una eliminación segura.

Existe una ficha de datos de seguridad a disposición del usuario profesional que la solicite.

El presente estuche contiene componentes que han sido clasificados por la directiva CE No. 1272/2008 de la siguiente manera:

Advertencia

H317 Puede provocar una reacción alérgica en la piel.

Prevención:

P261 Evitar respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/los vapores/el aerosol.

P272 Las prendas de trabajo contaminadas no podrán sacarse del lugar de trabajo.

P280 Llevar guantes de protección.

Respuesta:

P333 + P313 En caso de irritación o erupción cutánea: Consultar a un médico.

P362 + P364 Quitar las prendas contaminadas y lavarlas antes de volver a usarlas.

Eliminación:

P501 Eliminar el contenido/el recipiente en una planta de eliminación de residuos aprobada.

Las indicaciones de seguridad del producto corresponden a los criterios del sistema globalmente armonizado de clasificación y etiquetado de productos químicos (GHS por sus siglas en inglés) válidas en la UE.

Contacto telefónico internacional: +49-621-7590

Evite la formación de espuma en reactivos y muestras de todo tipo (especímenes, calibradores y controles).

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD:

Conservar a 2-8°C.

No congelar.

Conservar el kit de reactivos Elecsys en posición vertical para garantizar la disponibilidad total de las micropartículas durante la mezcla automática antes del uso.

DILUCIÓN:

Las muestras con concentraciones de NSE superiores al intervalo de medición pueden diluirse con Diluent NSE. La dilución recomendada es de 1:2. La concentración de la muestra diluida debe superar los 50 ng/mL.

Multiplicar los resultados por el factor de dilución.

MATERIAL REQUERIDO ADICIONALMENTE (NO SUMINISTRADO):

• 12133121122, NSE CalSet, 4 x 1.0 mL

• 11776452122, PreciControl Tumor Marker, para 4 x 3.0 mL

• 07360070190, PreciControl Lung Cancer, para 4 x 3.0 mL

• 03004864122, Diluent NSE, 4 x 3 mL de diluyente para muestras

• Equipo usual de laboratorio

• Analizador cobas e

Material adicional para el analizador cobas e 411:

• 11662988122, ProCell, 6 x 380 mL de tampón del sistema

• 11662970122, CleanCell, 6 x 380 mL de solución de limpieza para la célula de medida

• 11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL de aditivo para el agua del depósito de lavado

• 11933159001, Adaptador para SysClean

• 11706802001, AssayCup, 60 x 60 cubetas de reacción

• 11706799001, AssayTip, 30 x 120 puntas de pipeta

• 11800507001, Clean-Liner

Materiales adicionales para los analizadores cobas e 601 y cobas e 602:

• 04880340190, ProCell M, 2 x 2 L de tampón del sistema

• 04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L de solución de limpieza para la célula de medida

• 03023141001, PC/CC-Cups, 12 recipientes para atemperar las soluciones ProCell M y CleanCell M antes de usar

• 03005712190, ProbeWash M, 12 x 70 mL de solución de limpieza al finalizar un ciclo y enjuagar tras cambio de reactivos

• 12102137001, AssayTip/AssayCup, 48 bandejas con 84 cubetas de reacción y puntas de pipeta, bolsas de residuos

• 03023150001, WasteLiner, bolsas de residuos

• 03027651001, SysClean Adapter M

Materiales adicionales para todos los analizadores:

• 11298500316, ISE Cleaning Solution/Elecsys SysClean, 5 x 100 mL de solución de limpieza para el sistema

MATERIAL SUMINISTRADO:

Consultar la sección "Reactivos - Soluciones de trabajo" en cuanto a los reactivos suministrados.

CALIBRACIÓN:

Trazabilidad: El presente método ha sido estandarizado frente a la prueba Enzymun-Test NSE.

Cada reactivo Elecsys contiene un código de barras que incluye información específica para la calibración del lote de reactivos. La curva máster predefinida es adaptada al analizador a través del CalSet correspondiente.

Intervalo de calibraciones: Efectuar la calibración una vez por lote de reactivos con reactivo fresco de un kit de reactivos registrado como máximo 24 horas antes en el analizador.

El intervalo de calibración puede ampliarse si el laboratorio asegura una verificación aceptable de la calibración.

Se recomienda repetir la calibración:

• Después de 12 semanas si se trata del mismo lote de reactivos

• Después de 7 días (si se utiliza el mismo kit de reactivos en el analizador)

• En caso necesario: por ejemplo, si los valores del control de calidad están fuera del intervalo definido

CONTROL DE CALIDAD:

Efectuar el control de calidad con PreciControl Lung Cancer o PreciControl Tumor Marker.

Adicionalmente pueden emplearse otros controles apropiados.

Los controles de los diferentes intervalos de concentración deberían efectuarse junto con el test en determinaciones simples por lo menos 1 vez cada 24 horas, con cada estuche de reactivos y después de cada calibración.

Adaptar los intervalos y límites de control a los requisitos individuales del laboratorio. Los resultados obtenidos deben hallarse dentro de los límites definidos. Cada laboratorio debería establecer medidas correctivas a seguir en caso de obtener valores fuera del intervalo definido.

Si fuera necesario, repetir la medición de las muestras en cuestión.

Cumplir con las regulaciones gubernamentales y las normas locales de control de calidad pertinentes.

CÁLCULO:

El analizador calcula automáticamente la concentración de analito de cada muestra (en ng/mL o μg/L).

ESPECIFICIDAD ANALÍTICA:

Los anticuerpos monoclonales 18E5 y 84B10 empleados en el test ELECSYS NSE han sido desarrollados especialmente contra la subunidad ℽ de la enolasa.

INFORMACIÓN DEL SISTEMA:

Analizador cobas e 411: número de test 770

Analizadores cobas e 601 y cobas e 602: código de aplicación 155

Nota: El valor medido de NSE de una muestra de paciente puede variar según el método de ensayo aplicado. Por lo tanto, el laboratorio siempre debe indicar el método de determinación de NSE empleado. Los valores de NSE de un paciente, obtenidos mediante diferentes procedimientos de test, no pueden compararse directamente entre sí pudiendo dar lugar a interpretaciones erróneas por parte del médico. En caso de cambiar el método de determinación de la NSE durante el control del tratamiento, los valores del mismo deben confirmarse en el período de transición mediante mediciones paralelas de ambos métodos.

LÍMITES E INTERVALOS:

Intervalo de medición: 0.050-370 ng/mL (definido por el límite de detección y el máximo de la curva máster). Los valores inferiores al límite de detección inferior se indican como < 0.050 ng/mL. Los valores superiores al intervalo de medición se indican como > 370 ng/mL o, en muestras diluidas 2 veces, hasta 740 ng/mL.

Límites inferiores de medición:

Límite de detección inferior del test:

Límite de detección inferior: < 0.05 ng/mL

El Límite de Detección Inferior equivale a la menor concentración medible de analito que puede distinguirse de cero. Se calcula como la concentración situada a 2 desviaciones estándar por encima del estándar más bajo (calibrador máster, estándar 1 + 2 DE, estudio de repetibilidad, n= 21).

PRECISIÓN:

La precisión ha sido determinada mediante reactivos Elecsys, un pool de sueros humanos y controles en un protocolo modificado (EP5-A) del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): 6 veces por día durante 10 días (n= 60); repetibilidad en un analizador MODULAR ANALYTICS E170, n= 21. Se obtuvieron los resultados siguientes:

b) TM = Tumor Marker

c) LC = Lung Cancer

CARACTERÍSTICAS:

La NSE es una isoforma celular de la enzima glucolítica enolasa. NSE es considerada como un marcador tumoral de gran valor para el seguimiento del carcinoma pulmonar de células pequeñas (SCLC), concretamente cuando se combina con el péptido liberador de progastrina (ProGRP).1,2 Se ha demostrado que las concentraciones de NSE en pacientes con SCLC se correlacionan con la carga tumoral, el número de focos metastásicos y la respuesta al tratamiento.

También en carcinomas pulmonares de células no pequeñas (NSCLC) se han encontrado concentraciones elevadas de NSE aunque todavía no se conoce exactamente su valor predictivo y diagnóstico para dicha enfermedad.3 Se han encontrado concentraciones séricas elevadas de NSE en todos los estadios del neuroblastoma. La incidencia de concentraciones elevadas es mayor en enfermedades metastásicas diseminadas y correlaciona con un pronóstico desfavorable.3

Las concentraciones de NSE pueden ser elevadas en neoplasias malignas neuroendocrinas así como en muchas otras enfermedades tumorales y condiciones clínicas incluyendo melanoma, seminoma, carcinoma de células renales, tumor de células de Merkel, tumor carcinoide, disgerminoma, teratoma inmaduro, feocromocitoma maligno, daño tisular cerebral debido a un traumatismo cerebral o después de un ataque cerebrovascular isquémico, hemorragia intracerebral, enfermedades cerebrales inflamatorias y enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.3

SENSIBILIDAD FUNCIONAL:

0.25 ng/mL

La sensibilidad funcional es la menor concentración de analito cuya medición puede reproducirse con un coeficiente de variación de la precisión intermedia < 20%.

LIMITACIONES DEL ANÁLISIS - INTERFERENCIAS:

El ensayo no se ve afectado por ictericia (bilirrubina < 1231 μmol/L o < 72 mg/dL), lipemia (triglicéridos < 22.8 mmol/L o < 2000 mg/dL) ni biotina < 409 nmol/L o < 100 ng/mL.

Criterio: Recuperación dentro de ± 10% del valor inicial.

La hemólisis interfiere debido a que los eritrocitos contienen NSE.

En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (> 5 mg/día), no recoger la muestra antes de transcurridas como mínimo 8 horas tras la última administración.

No se han observado interferencias por factores reumatoides hasta una concentración de 1500 UI/mL.

No se ha registrado el efecto prozona (high-dose hook) con concentraciones de NSE de hasta 100000 ng/mL.

Se analizaron in vitro 21 fármacos de uso común. No se encontraron interferencias con el presente ensayo.

En casos aislados pueden presentarse interferencias por títulos extremadamente altos de anticuerpos dirigidos contra anticuerpos específicos del analito, la estreptavidina o el rutenio. Estos efectos se han minimizado gracias a un adecuado diseño del test.

También se pueden registrar concentraciones elevadas de NSE en presencia de enfermedades pulmonares benignas y de neoplasias neuroendocrinas malignas tales como el tumor carcinoide, el carcinoma medular de tiroides, el carcinoma cutáneo de células de Merkel y los carcinomas del páncreas y de la médula suprarrenal.5,6,7

Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse teniendo en cuenta la anamnesis del paciente, la exploración clínica así como los resultados de otros exámenes.

SÍMBOLOS:

Roche Diagnostics utiliza los siguientes símbolos y signos adicionalmente a los indicados en la norma ISO 15223-1 (para los EE.UU.: consulte dialog.roche.com para la definición de los símbolos usados):

La barra del margen indica suplementos, eliminaciones o cambios.

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D-68305 Mannheim

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OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS:

Solo se ha analizado y considerado apto el tipo de muestras aquí indicado.

Suero recogido en tubos estándar de muestra o en tubos que contienen gel de separación.

No usar plasma.

Centrifugar la de sangre dentro de 1 hora. La presencia de NSE en eritrocitos y plaquetas provoca resultados elevados en muestras hemolizadas o que no hayan sido centrifugadas correctamente (por ejemplo, centrifugación retrasada).4

Estabilidad: 2 días a 20-25°C, 5 días a 2-8°C, 3 meses a -20°C (± 5°C). Congelar sólo una vez.

Nota: La estabilidad indicada para -20°C solo tiene validez bajo las siguientes condiciones: se congela un volumen máximo de 1 mL de muestra a temperaturas inferiores a -70°C y después, se conserva a -20°C. Si se emplean otros procedimientos de congelación, las muestras tienden a producir valores disminuidos.

Los tipos de muestra aquí indicados fueron analizados con tubos de recogida de muestras seleccionados, comercializados en el momento de efectuar el análisis, lo cual significa que no fueron analizados todos los tubos de todos los fabricantes. Los sistemas de recogida de muestras de diversos fabricantes pueden contener diferentes materiales que, en ciertos casos, pueden llegar a afectar los resultados de los análisis. Si las muestras se procesan en tubos primarios (sistemas de recogida de muestras), seguir las instrucciones del fabricante de tubos.

Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de realizar el ensayo.

No emplear muestras inactivadas por calor.

No utilizar muestras ni controles estabilizados con azida.

Se debe garantizar una temperatura de 20-25°C para la medición de muestras, calibradores y controles.

Para evitar posibles efectos de evaporación, determinar las muestras, los calibradores y los controles que se sitúan en los analizadores dentro de un lapso de 2 horas.

PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS:

Los reactivos incluidos en el kit están listos para el uso y forman una unidad inseparable.

La información necesaria para el correcto funcionamiento se introduce en el analizador a través de los códigos de barras de los reactivos.

COMPARACIÓN DE MÉTODOS:

Una comparación del método ELECSYS NSE (y) con el Enzymun-Test NSE (x) basada en muestras clínicas ha dado las siguientes correlaciones:

Número de muestras medidas: 133

Las concentraciones de las muestras se situaron entre 5.8 y 104 ng/mL.

DATOS ESPECÍFICOS DEL FUNCIONAMIENTO DEL TEST:

A continuación, se indican los datos representativos del funcionamiento de los analizadores. Los resultados de cada laboratorio en particular pueden diferir de estos valores.

PRINCIPIO DEL TEST:

Técnica sándwich. Duración total del test: 18 minutos.

• 1.ª Incubación: 20 μL de muestra, un anticuerpo monoclonal biotinilado anti-NSE y un anticuerpo monoclonal anti-NSE marcado con quelato de rutenioa) forman un complejo sándwich.

• 2.ª Incubación: Después de incorporar las micropartículas recubiertas de estreptavidina, el complejo formado se fija a la fase sólida por interacción entre la biotina y la estreptavidina.

• La mezcla de reacción es trasladada a la célula de medida donde, por magnetismo, las micropartículas se fijan a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con ProCell/ProCell M. Al aplicar una corriente eléctrica definida se produce una reacción quimioluminiscente cuya emisión de luz se mide con un fotomultiplicador.

• Los resultados se determinan mediante una curva de calibración generada específicamente para el instrumento a partir de una calibración a 2 puntos y una curva máster proporcionada por el código de barras del reactivo o el código de barras electrónico.

a) Quelato Tris (2,2’-bipiridina) rutenio (II) (Ru(bpy))

REACTIVOS - SOLUCIONES DE TRABAJO:

El pack de reactivos está etiquetado como NSE.

M Micropartículas recubiertas de estreptavidina (tapa transparente), 1 frasco, 6.5 mL:

Micropartículas recubiertas de estreptavidina: 0.72 mg/mL; conservante.

R1 Anticuerpos anti-NSE~biotina (tapa gris), 1 frasco, 10 mL:

Anticuerpo 18E5 monoclonal biotinilado anti-NSE (ratón) 1.0 mg/L; tampón fosfato 50 mmol/L, pH 7.2; conservante.

R2 Anticuerpos anti-NSE~Ru(bpy) (tapa negra), 1 frasco, 10 mL:

Anticuerpo 84B10 monoclonal anti-NSE (ratón) marcado con quelato de rutenio 1.0 mg/L; tampón fosfato 50 mmol/L, pH 7.2; conservante.

REALIZACIÓN DEL TEST:

Para garantizar el funcionamiento óptimo del test, observe las instrucciones de la presente metódica referentes al analizador empleado. Consulte el manual del operador apropiado para obtener las instrucciones de ensayo específicas del analizador.

Las micropartículas se mezclan automáticamente antes del uso. Los parámetros de test se introducen a través de los códigos de barras impresos en el reactivo. Pero si, excepcionalmente, el analizador no pudiera leer el código de barras, el código numérico de 15 cifras deberá introducirse manualmente.

Antes del uso, atemperar los reactivos refrigerados a aproximadamente 20°C y colocarlos en el rotor de reactivos (20°C) del analizador. Evitar la formación de espuma. El analizador realiza automáticamente los procesos de atemperar, abrir y tapar los reactivos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1 Molina R, Filella X, Augé JM. ProGRP: A New Biomarker for Small Cell Lung Cancer. EJCMO 2009;1:25-32.

2 Molina R, Marrades RM, Auge JM, et. al. Assessment of a Combined Panel of Six Serum Tumor Markers for Lung Cancer, American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 2016;193(4):428-437.

3 Isgro MA, Bottoni P, Scattena R. Neuron-Specific Enolase as a Biomarker: Biochemical and Clinical Aspects. Advances in Experimental Medecine and Biology 2015;867:125-43.

4 Schneider J. Tumor markers in detection of lung cancer. Adv Clin Chem 2006;42:1-41.

5 Sheppard MN, Corrin B, Bennett MH, et al. Immunochemical localization of neuron specific enolase in small cell carcinomas and carcinoid tumours of the lung. Histopathol 1984;8:171-181.

6 Wick MR, Bernd MD, Scheithauer W, et al. Neuron-specific Enolase in Neuroendocrine Tumors of the Thymus, Bronchia, and Skin. Am J Clin Pathol 1982;79:703-707.

7 Simpson S, Vinik AI, Marangos PJ, et al. Immunohistochemical Localization of Neuron-Specific Enolase in Gastroenteropancreatic Neuroendocrine Tumors. Cancer 1984;54:1364-1369.

8 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III.

J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790.

Para más información acerca de los componentes, consultar el manual del operador del analizador, las hojas de aplicación y las metódicas correspondientes (disponibles en su país).

En la presente metódica se emplea como separador decimal un punto para distinguir la parte entera de la parte fraccionaria de un número decimal. No se utilizan separadores de millares.

Todo incidente grave que se haya producido en relación con el producto se comunicará al fabricante y a la autoridad competente del Estado Miembro en el que se encuentre el usuario y/o el paciente.

Para el resumen del informe de seguridad y funcionamiento, consulte: https://ec.europa.eu/tools/eudamed