INTERPRETACIÓN DE LAS TINCIONES Y RESULTADOS PREVISTOS:

El patrón de tinción celular de CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY es, por lo general, citoplasmático y nuclear, pero con menor frecuencia se puede observar un patrón membranoso.9

USO PREVISTO:

800-2918

05278783001

50

CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY está destinado a su uso en laboratorio para la detección cualitativa inmunohistoquímica de la proteína quinasa del linfoma anaplásico (ALK) mediante microscopía óptica en secciones de tejido fijado con formol y embebido en parafina teñido con un instrumento BenchMark IHC/ISH.

La interpretación de este producto debe correr a cargo de un anatomopatólogo cualificado junto con un examen histológico, la información clínica pertinente y los controles adecuados. Este anticuerpo está destinado para uso diagnóstico in vitro (IVD).

Figura 1. Tinción con el anticuerpo CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) en ganglio linfático inguinal y positivo en linfoma anaplásico de células grandes.

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:

Tras la recepción y cuando no se utilice, consérvese entre 2 y 8°C. No lo congele.

Para garantizar una dispensación adecuada del reactivo y la estabilidad del anticuerpo, vuelva a poner el tapón del dispensador después de cada uso y almacene el dispensador inmediatamente en la nevera, en posición vertical.

Todos los dispensadores de anticuerpos tienen una fecha de caducidad. Si se almacena correctamente, el reactivo se mantendrá estable hasta la fecha indicada en la etiqueta. No usar el reactivo después de la fecha de caducidad.

MATERIAL SUMINISTRADO:

El CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY contiene reactivo suficiente para 50 pruebas.

Un dispensador de 5 mL de CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY contiene aproximadamente 25 μg de anticuerpo monoclonal de ratón.

El anticuerpo se diluye en un tampón fosfato con una proteína transportadora y ProClin 300, un conservante.

La concentración del anticuerpo específico es aproximadamente de 5 μg/mL. No se ha observado ninguna reactividad del anticuerpo no específica conocida en este producto.

El CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY es un anticuerpo monoclonal de ratón producido como sobrenadante de un cultivo de tejido.

Consulte en la hoja de datos correspondiente del kit de detección de VENTANA las descripciones detalladas de: Principio del procedimiento, Material y métodos, Recogida y preparación de muestras para análisis, Procedimientos de control de calidad, Resolución de problemas, Interpretación de los resultados y Limitaciones.

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS:

No se suministran reactivos de tinción como los kits de detección de VENTANA ni componentes auxiliares, incluyendo portaobjetos de control de tejido negativos y positivos.

No todos los productos que aparecen en la hoja de datos están disponibles en todos los lugares. Consulte al representante local de asistencia técnica de Roche.

No se suministran los reactivos y materiales siguientes, pero pueden ser necesarios para la tinción:

1. Tejido de control recomendado

2. Portaobjetos para microscopio con carga positiva

3. Negative Control (Monoclonal) (nº cat. 760-2014/05266670001)

4. OptiView DAB IHC Detection Kit (nº cat. 760-700/06396500001)

5. OptiView Amplification Kit (nº cat. 760-099/06396518001 [50 pruebas] o nº cat. 860-099/06718663001 [250 pruebas])

6. ultraView Universal DAB Detection Kit (nº cat. 760-500/05269806001)

7. Amplification Kit (nº cat. 760-080/05266114001)

8. EZ Prep Concentrate (10X) (nº cat. 950-102/05279771001)

9. Reaction Buffer Concentrate (10X) (nº cat. 950-300/05353955001)

10. LCS (Predilute) (nº cat. 650-010 / 05264839001)

11. ULTRA LCS (Predilute) (nº cat. 650-210/05424534001)

12. Cell Conditioning Solution (CC1) (nº cat. 950-124/05279801001)

13. ULTRA Cell Conditioning Solution (ULTRA CC1) (nº cat. 950-224 / 05424569001)

14. Hematoxylin II (nº cat. 790-2208/05277965001)

15. Bluing Reagent (nº cat. 760-2037/05266769001)

16. Equipo de laboratorio de uso general

17. Instrumento BenchMark IHC/ISH

CONTROL DE REACTIVOS NEGATIVO:

Además de la tinción con el CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY, se debe teñir un segundo portaobjetos con el reactivo de control negativo correspondiente.

CONTROL DE TEJIDO POSITIVO:

La práctica de laboratorio óptima consiste en incluir una sección de control positivo en el mismo portaobjetos que el tejido de la prueba. Esto contribuye a identificar fallos al aplicar los reactivos al portaobjetos. Un tejido con una tinción débil positiva es más adecuado para el control de calidad. El tejido de control puede contener elementos de tinción tanto positiva como negativa y ambos sirven como control positivo y negativo. El tejido de control debe ser una muestra de autopsia reciente, biopsia o cirugía preparada o fijada con la mayor brevedad con un proceso idéntico al de las secciones de prueba.

Los controles de tejido positivos conocidos solo se deben usar para monitorizar el comportamiento correcto de los reactivos y los instrumentos, y no como ayuda para establecer un diagnóstico específico de las muestras de prueba. Si los controles de tejido positivos no muestran una tinción positiva, los resultados de las muestras de la prueba se deben considerar no válidos.

Como ejemplo de tejido de control positivo para este anticuerpo se encuentra el linfoma anaplásico de células grandes positivo en ALK.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO:

Rendimiento de análisis: Se realizaron pruebas de tinción para evaluar la sensibilidad, especificidad y precisión; los resultados se indican a continuación.

Sensibilidad y especificidad:

Tabla 4. La sensibilidad/especificidad del CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY se determinó analizando tejidos normales FFPE

a Entre los tejidos evaluados figura el de glándula suprarrenal normal o hiperplásica.

b Entre los tejidos evaluados se encuentran los tejidos normales o reactivos, de inflamación y de congestión.

Tabla 5. La sensibilidad/especificidad del CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY se determinó analizando una variedad de tejidos neoplásicos FFPE

Precisión:

Se llevaron a cabo estudios de precisión con el CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY para demostrar:

• La precisión entre lotes del anticuerpo.

• La precisión dentro de la sesión y entre días en un instrumento BenchMark ULTRA.

• La precisión entre instrumentos en los instrumentos BenchMark GX y BenchMark ULTRA.

• La precisión entre plataformas entre los instrumentos BenchMark GX y BenchMark ULTRA.

Todos los estudios cumplieron los criterios de aceptación.

Se demostró la precisión del instrumento BenchMark ULTRA PLUS mediante ensayos representativos. Entre los estudios que se llevaron a cabo figuraban la repetibilidad entre sesiones y la precisión intermedia entre días y entre análisis. Todos los estudios cumplieron los criterios de aceptación.

RENDIMIENTO CLÍNICO:

Los datos de rendimiento clínico pertinentes para el uso previsto del CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY se evaluaron mediante revisiones sistemáticas de la documentación pertinente. Los datos obtenidos respaldan la utilización del dispositivo de acuerdo con su uso previsto.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES:

1. Para uso diagnóstico in vitro (IVD).

2. Solo para uso profesional.

3. PRECAUCIÓN: En Estados Unidos, las normas nacionales restringen la venta de este dispositivo a médicos autorizados o por orden de estos. (Rx Only)

4. No utilizar por encima del número especificado de ensayos.

5. La solución ProClin 300 se utiliza como conservante en este reactivo. Está clasificada como irritante y puede ocasionar sensibilización por contacto con la piel. Adopte precauciones razonables cuando la manipule. Evite el contacto de reactivoscon los ojos, la piel y las membranas mucosas. Utilice ropa protectora y guantes.

6. Los portaobjetos con carga positiva pueden verse afectados por presiones ambientales, dando lugar a una tinción incorrecta. Póngase en contacto con su representante de servicio de Roche para obtener más información sobre el uso de este tipo de portaobjetos.

7. Los materiales de origen animal o humano deben manipularse como materiales biopeligrosos para el medio ambiente y eliminarse con las precauciones adecuadas. En caso de exposición, deberán seguirse las directivas sanitarias de las autoridades responsables.13,14

8. Evite el contacto de los reactivos con los ojos y las membranas mucosas. Si los reactivos entran en contacto con zonas sensibles, lávelas con agua abundante.

9. Evite la contaminación microbiana de los reactivos, dado que podría producir resultados incorrectos.

10. Para obtener más información sobre el uso de este dispositivo, consulte el Manual del usuario del instrumento BenchMark IHC/ISH y las instrucciones de uso de todos los componentes necesarios que puede encontrar en dialog.roche.com.

11. Consulte a las autoridades locales o nacionales sobre el método de eliminación recomendado.

12. El etiquetado de seguridad de los productos sigue principalmente las directrices del SGA de la UE. Está disponible bajo petición la hoja de datos de seguridad para los usuarios profesionales.

13. Para comunicar la sospecha de incidentes graves relacionados con este dispositivo, póngase en contacto con su representante local de servicio Roche y con las autoridades competentes del estado o país miembro de residencia del usuario.

Este producto contiene componentes clasificados como sigue de conformidad con el Reglamento (CE) nº 1272/2008:

Tabla 1. Información de riesgos

Este producto contiene CAS nº 55965-84-9, masa de reacción de: 5-cloro-2-metil-2H- isotiazol-3-ona y 2-metil-2H-isotiazol-3-ona (3:1).

LIMITACIONES ESPECÍFICAS:

La detección mediante el sistema OptiView detection es, por lo general, más sensible que la del sistema ultraView detection. El usuario debe validar los resultados obtenidos con este reactivo y los sistemas de detección.

Es posible que no estén todos los ensayos registrados en cada instrumento. Póngase en contacto con el representante local de servicio Roche para obtener más información.

PREPARACIÓN DE MUESTRAS:

Los tejidos fijados con formol y embebidos en parafina (FFPE) que se procesan de forma habitual resultan adecuados para su uso con este anticuerpo primario cuando se utiliza con los kits de detección VENTANA y los instrumentos BenchMark IHC/ISH. El fijador de tejido recomendado es formol tamponado neutro al 10%.12 Las secciones de tejido se deben cortar con un grosor aproximado de 4 μm y colocarse en portaobjetos cargados positivamente. Los portaobjetos deben teñirse inmediatamente, ya que la antigenicidad de los cortes de tejido puede disminuir con el tiempo.

Se recomienda que los controles positivos y negativos se ejecuten simultáneamente con muestras desconocidas.

PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO:

El CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY se une a la proteína ALK en secciones de tejido fijado con formol y embebido en parafina. El anticuerpo puede visualizarse mediante el ultraView Universal DAB Detection Kit (nº cat. 760-500/05269806001) o el OptiView DAB IHC Detection Kit (nº cat. 760-700/06396500001). Consulte la hoja de datos correspondiente para obtener más información.

PROCEDIMIENTOS DE TINCIÓN:

Los anticuerpos primarios VENTANA se han desarrollado para su uso en los instrumentos BenchMark IHC/ISH junto con los kits de detección de VENTANA y sus accesorios. Consulte las tablas que aparecen a continuación para ver los protocolos de tinción recomendados.

Este anticuerpo se ha optimizado para periodos de incubación específicos, pero el usuario debe validar los resultados obtenidos con este reactivo.

Los parámetros de los procedimientos automatizados se pueden mostrar, imprimir y editar según el procedimiento descrito en el Manual del usuario de los instrumentos. Consulte la hoja de datos del kit de detección VENTANA correspondiente para obtener más detalles sobre los procedimientos de tinción de inmunohistoquímica.

Para obtener más información sobre el uso correcto de este dispositivo, consulte la hoja de datos del dispensador en línea asociado con P/N 800-2918.

Tabla 2. Protocolo de tinción recomendado para CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY con OptiView DAB IHC Detection Kit en instrumentos BenchMark IHC/ISH

a Se demostró la concordancia entre los instrumentos BenchMark ULTRA y BenchMark ULTRA PLUS mediante ensayos representativos.

Tabla 3. Protocolo de tinción recomendado para el CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY con ultraView Universal DAB Detection Kit en instrumentos BenchMark IHC/ISH

a Se demostró la concordancia entre los instrumentos BenchMark ULTRA y BenchMark ULTRA PLUS mediante ensayos representativos.

Debido a variaciones en la fijación y el procesamiento del tejido, así como a las condiciones generales de los instrumentos y del entorno del laboratorio, puede que sea necesario aumentar o disminuir el tiempo de incubación del anticuerpo primario, el acondicionamiento celular o tratamiento previo de la proteasa en función de las muestras particulares, de la detección que se haya utilizado y de las preferencias del lector. Para obtener más información sobre las variables de fijación, consulte «Immunohistochemistry Principles and Advances».15

RESUMEN Y EXPLICACIÓN:

El gen humano de la quinasa del linfoma anaplásico (ALK) codifica una proteína receptora de tirosina quinasa de 200 kDa, que pertenece a la superfamilia de los receptores de insulina y que se encuentra en el cromosoma 2 (2p23).1,2 La proteína ALK se considera un receptor catalítico, una proteína de la superficie de la célula que se une a su ligando como un receptor de superficie celular y que desempeña una función esencial en la señalización transmembrana y en la comunicación entre células.3 En condiciones fisiológicas normales, se observa una elevada expresión de ALK en las neuronas, principalmente durante el desarrollo del feto, y la proteína participa en el desarrollo neuronal y la diferenciación.4-6 La presencia de expresión de ALK en tejidos adultos normales se limita a unos cuantos tipos de células del sistema nervioso, como las neuronas, los pericitos y las células endoteliales, a pesar de que no se conoce en profundidad su función fisiológica específica.5,7

El linfoma anaplásico de células grandes (ALCL) es un linfoma de linfocitos T de tipo no Hodgkin que se presenta como una enfermedad multiorgánica generalizada o como una enfermedad cutánea localizada.8-10 ALCL está definido por la presencia de un elevado nivel de expresión de CD30 y de varios antígenos de linfocitos T, a pesar de que la expresión de los marcadores de linfocitos pan-T a menudo se observa incompleta.10,11 Los casos de ALCL generalizado se clasifican en dos entidades clinicopatológicas diferentes en función de la presencia o ausencia de ALK.9,10 En el ALCL positivo en ALK se observa la expresión de la proteína ALK debido a las reorganizaciones genéticas de ALK, mientras que en el ALCL negativo en ALK, una entidad que morfológicamente es imposible de distinguir, no se dan estas características.9,11 La translocación cromosómica t(2;5)(p23;q35) da como resultado la formación de una proteína quimérica de 80 kDa que está formada por el gen de la nucleofosmina (NPM) y el producto de fusión del gen ALK (NPM-ALK).1 Aunque NPM es el par de fusión predominante en entre el 80 y el 90% de los casos de ALCL, se han identificado más de 25 pares de reorganización de ALK y se han observado varias proteínas quiméricas, como TMP3-ALK, ATIC-ALK y TFG-ALK en ALCL.6-9.

La detección de ALK mediante inmunohistoquímica (IHC) con el CONFIRM ANTI-ALK1 (ALK01) PRIMARY ANTIBODY puede servir de ayuda en el diagnóstico de ALCL positivo o negativo en ALK.

El patrón de tinción celular es citoplasmático y nuclear en la mayoría de los tumores con la translocación NPM-ALK, pero se limita al núcleo en la variante de células pequeñas y es habitualmente citoplasmático en los tumores que contienen otras variantes de translocación.9 Este anticuerpo se puede utilizar como parte del panel de estudios IHC.

REFERENCIAS :

1. Morris SW, Kirstein MN, Valentine MB, et al. Fusion of a Kinase Gene, ALK, to a Nucleolar Protein Gene, NPM, in Non-Hodgkin"s Lymphoma. Science. 1994;263(5151):1281-1284.

2. Morris SW, Naeve C, Mathew P, et al. ALK, the Chromosome 2 Gene Locus Altered by the T (2; 5) in Non-Hodgkin"s Lymphoma, Encodes a Novel Neural Receptor Tyrosine Kinase That Is Highly Related to Leukocyte Tyrosine Kinase (LTK). Oncogene. 1997;14(18):2175-2188.

3. Huang H. Anaplastic Lymphoma Kinase (ALK) Receptor Tyrosine Kinase: A Catalytic Receptor with Many Faces. Int J Mol Sci. 2018;19(11):3448.

4. Iwahara T, Fujimoto J, Wen D, et al. Molecular Characterization of ALK, a Receptor Tyrosine Kinase Expressed Specifically in the Nervous System. Oncogene. 1997;14(4):439-449.

5. Pulford K, Morris S, Turturro F. Anaplastic Lymphoma Kinase Proteins in Growth Control and Cancer. J Cell Physiol. 2004;199(3):330-358.

6. Hallberg B, Palmer RH. Mechanistic Insight into ALK Receptor Tyrosine Kinase in Human Cancer Biology. Nat Rev Can. 2013;13(10):685-700.

7. Pulford K, Lamant L, Espinos E, et al. The Emerging Normal and Disease-Related Roles of Anaplastic Lymphoma Kinase. Cell Mol Life Sci. 2004;61(23):2939-2953.

8. Amin HM, Lai R. Pathobiology of ALK+ Anaplastic Large-Cell Lymphoma. Blood. 2007;110(7):2259-2267.

9. Swerdlow-SH CE, Harris N, Jaffe E. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues (Revised 4th Edition). IARC: Lyon. 2017.

10. Dabbs DJ. Diagnostic Immunohistochemistry E-Book: Theranostic and Genomic Applications. Elsevier Health Sciences; 2017.

11. Xing X, Feldman AL. Anaplastic Large Cell Lymphomas: ALK Positive, ALK Negative, and Primary Cutaneous. Adv Anat Pathol. 2015;22(1):29-49.

12. Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and practice of histotechnology, 2nd Edition. The C.V. Mosby Company, St. Louis, 1980.

13. Occupational Safety and Health Standards: Occupational exposure to hazardous chemicals in laboratories. (29 CFR Part 1910.1450). Fed. Register.

14. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work.

15. Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. (NR Rose Ed.) ASM Press, 2002.

Nota: En este documento se ha usado el punto como separador decimal para marcar el borde entre la parte entera y la parte fraccionaria de los numerales con decimales. No se han usado separadores para las unidades de millar.

El resumen de los aspectos de seguridad y rendimiento se puede ver a continuación: https://ec.europa.eu/tools/eudamed

Símbolos: Ventana usa los siguientes símbolos y signos además de los indicados en la norma ISO 15223-1 (para EE. UU.: consulte en dialog.roche.com la definición de los símbolos usados):

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